依次移取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL标准葡萄糖工作液、2.0mL蒸馏水于6个25mL容量瓶中，加蒸馏水补足至2mL，再在每个容量瓶中加入　1.5mL3,5-二硝基水杨酸试剂，摇匀后将6个容量瓶放在沸水浴中加热5min，立即冷却。用蒸馏水定容至刻度，摇匀。用1cm比色皿在550nm处测其吸光度。以蒸馏水显色反应液做空白调零，记录不同浓度葡萄糖工作液的吸光度。以葡萄糖毫克数为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y），绘制标准工作曲线（或建立吸光度为Y、标准葡萄糖毫克数为X的回归方程）。